Skip to content

Porównanie aktywności oksydazy NADH i NADPH w granulkach izolowanych z ludzkich leukocytów wielojądrzastych za pomocą testu fluorometrycznego.

2 miesiące ago

358 words

Metoda fluorymetryczna do oznaczania nukleotydów pirydynowych została dostosowana do wykorzystania w badaniu zredukowanych oksydaz nukleotydów pirydynowych w ludzkich leukocytach wielojądrzastych. W obecności silnej zasady utlenione formy nukleotydów pirydyny tworzą wysoce fluorescencyjny produkt. Małe ilości NAD (P) powstałe w wyniku reakcji oksydazy można określić z dużą czułością. Metodę tę porównano z oznaczeniem radioizotopowym do utleniania NADPH. Obie metody dały zasadniczo takie same wyniki w kategoriach nanomoli NADP wytwarzanych przez próbki kontrolne, spoczynkowe i fagocytujące. Zarówno aktywność oksydazy NADPH jak i NADH były niewrażliwe na cyjanek. Utlenianie NADPH miało optimum pH na poziomie 5,5, podczas gdy dla NADH było to 6,0. Granulki wyizolowane z komórek fagocytujących rutynowo wykazywały większą aktywność wobec obu substratów (dwa do trzech razy) niż granulki z komórek spoczynkowych. Obie aktywności były zlokalizowane głównie w frakcji granulki przygotowanej przez wirowanie różnicowe. Utlenianie NADPH było rutynowo cztery do pięciu razy wyższe niż NADH, z wyjątkiem bardzo wysokich poziomów substratu. Mierzalne utlenianie NADH rzadko występowało poniżej 0,80 mM NADH, natomiast utlenianie NADPH można było łatwo zmierzyć przy 0,20 mM. Zbadano jednego pacjenta z przewlekłą chorobą ziarniniakową. Przy niskich poziomach substratu nie zaobserwowano aktywności względem substratu w granulkach wyizolowanych z komórek spoczynkowych lub fagocytujących tego pacjenta, podczas gdy granulki wyizolowane z normalnych komórek kontrolnych wykazały znaczną aktywność na tych poziomach substratu. Oczyszczanie czynności rozpoczęto liniowymi gradientami sacharozy. Obie czynności współ-osadzają się na bardzo gęstym obszarze gradientu, w regionie innym niż ten, w którym zwykle harmonizuje się membrana lub granulat azulhilu. Frakcje o szczytowym gradiencie wykazują 10-30-krotny wzrost aktywności właściwej w stosunku do porównywalnych frakcji granulek. Dane te sugerują, że aktywności oksydazy są związane z jednym enzymem, który ma różne powinowactwo do dwóch substratów i wspierają tezę, że utlenianie NADPH jest odpowiedzialne za rozerwanie metaboliczne towarzyszące fagocytozie w ludzkim PMNL.
[podobne: przeglądarka skierowań na leczenie sanatoryjne z nfz, kiedy dni płodne po okresie, polski bux ]
[podobne: polski bux, choroba parkinsona ćwiczenia, myśli samobójcze depresja ]