Skip to content

Wykrywanie aktywacji białka C u ludzi.

2 miesiące ago

336 words

Opracowaliśmy test radioimmunologiczny (RIA) dla dodekapeptydu uwolnionego z białka C, gdy ten zymogen jest aktywowany przez trombinę związaną z trombomoduliną obecną w śródbłonku naczyniowym. Peptyd aktywujący białko C (PCP) zsyntetyzowano stosując metodę Merrifielda w fazie stałej. Antysurowice hodowano na królikach do syntetycznego analogu sprzężonego z albuminą surowicy bydlęcej z aldehydem glutarowym. Otrzymaną populację przeciwciał użyto razem z wyznakowanym 125I tyrozynowanym ligandem i różnymi stężeniami nieznakowanego PCP w celu skonstruowania podwójnego przeciwciała RIA zdolnego do pomiaru zaledwie 10 pM tego składnika. Ustaliliśmy, że syntetyczny dodekapeptyd ma taką samą immunoreaktywność jak natywny peptyd i że reaktywność białka C jest mniejsza niż 1/2 000 od PCP w ujęciu molowym. Niezwykle niskie poziomy peptydu u zdrowych osobników, jak również niespecyficzny udział składników osocza w sygnale immunoreaktywnym, wymagały opracowania procedury, dzięki której PCP mógł być w sposób odtwarzalny uzyskiwany z osocza i zatężany około 20-krotnie. Ta metodologia pozwoliła nam wykazać, że poziomy PCP w osoczu u 17 zdrowych dawców wynosiły średnio 6,47 pM, a wzrosty do 180 pM obserwowano u osób z dowodami rozsianego wykrzepiania wewnątrznaczyniowego. Na ważność tych pomiarów aktywacji białka C przemawia fakt, że w obu tych sytuacjach sygnał RIA migruje na wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami w sposób identyczny z natywnym dodekapeptydem. Zauważyliśmy również, że średnie stężenie PCP u siedmiu pacjentów w pełni antykoagulowanych z warfaryną wynosiło średnio 2,61 pM. Nasze badania pokazują również, że PCP jest usuwane z osocza naczelnych z t1 / 2 około 5 min. Biorąc pod uwagę, że tl / 2 aktywowanego białka C ocenia się na 10-15 minut, ten ostatni wydaje się wywierać wpływ na aktywowane kofaktory układu krzepnięcia przy stężeniach znacznie mniejszych niż 1,0 nM.
[więcej w: myśli samobójcze depresja, dna moczanowa poradnik dla pacjenta, zdrowe śniadanie przepisy ]
[hasła pokrewne: dna moczanowa poradnik dla pacjenta, sytuacja kryzysowa definicja, przeglądarka skierowań na leczenie sanatoryjne z nfz ]